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ELISA試劑盒在實驗前的準備有哪些?

發布日期:2019/10/25 8:59:49 閱讀次數:127次

    elisa試劑盒實驗固相載體的挑選:很多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。
    包被抗體(或抗原)的挑選:將抗體(或抗原)吸附在固相載體外表時,請求純度要好,吸附時一般請求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時刻及其蛋白量也有必定影響,一般多選用4℃ 18~24小時。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌效果,應留意防護。其方式可所以凹孔平板、試管、珠粒等。現在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不論何種載體,在運用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反響,調查其顯色反響是不是均一性,據此判明其吸附性能是不是杰出。正式實驗時,應別離以陽性對照與陰性對照操控實驗條件,待檢樣品應作一式二份,以確保實驗成果的性。

    在ELISA中,進行各項實驗條件的挑選是很主要的,其間包含:
    有條件者應運用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是現在較為滿足的供氫體。底物效果一段時刻后,應參加強酸或強堿以停止反響。一般底物效果時刻,以10-30分鐘為宜。底物運用液必須新鮮制造,尤其是H2O2在臨用前參加。然后再固定其它條件或采納“方陣法”(包被物、待檢樣品的參閱品及酶符號抗體別離為不一樣的稀釋度)在正式實驗體系里地滴定其作業濃度。有時本底較高,闡明有非特異性反響,可選用羊血清、兔血清或BSA等封閉。酶的底物及供氫體的挑選:對供氫體的挑選請求是價廉、安全、有明顯地顯色反響,而自身無色。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定:即用不一樣的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它實驗條件相同時,調查陽性標本的OD值。挑選OD值zui大而蛋白量起碼的濃度。關于多數蛋白質來說一般為1~10μg/ml。ELISA試劑盒實驗酶符號抗體作業濃度的挑選:首先用直接ELISA法進行開始效價的滴定(見酶符號抗體部份)。

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