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簡述ELISA試劑盒規范曲線的制作關鍵

發布日期:2019/11/12 8:49:46 閱讀次數:38次

    很多試劑檢查都涉及到規范曲線的疑問,elisa試劑盒規范曲線做的好與壞會直接影響到試驗的成果,乃至是到試驗的成敗,那么終究怎么繪制或制造規范曲線呢?

    一、做規范曲線樣品檢查時有幾個疑問需求注意

    1.樣品的濃度等目標是依據規范曲線計算出來的,所以首先要把做規范曲線看作是比做正式試驗還要主要的一件事,不然后邊的試驗成果無從談起。

    2.設置規范曲線樣品的規范濃度規模要有一個對比大的跨度,而且要能包括你所要檢查試驗樣品的濃度,即樣品的濃度要在規范曲線濃度規模以內,人ELISA試劑盒包括上限和下限。而對于呈S型的規范曲線,盡量要使試驗樣品的濃度在中心斜度zui陡段,即曲線簡直成直線的規模內。

    3.選用倍比稀釋法制造規范曲線中的規范樣品濃度,ELISA試劑盒這么就能夠確保規范樣品的濃度不會出現較大的違背。

    4.檢查規范樣品時,應按濃度遞加順序進行,以削減高濃度對低濃度的影響,進步性。

    5.規范曲線的樣品數通常為7個點,但zui少要確保有5個點。

    6.做出的規范曲線相數因試驗要求不一樣而有所變化,但通常來說,相數Rzui少要大于0.98,對于有些試驗,zui少要0.99乃至是0.999.

    二、ELISA試劑盒挑選啥方程去擬合

    1.在S曲線的低濃度部分能夠用乘冪方程極好的擬合,中低濃度部分能夠用直線方程,中心部分可用對數方程,而中后段可用四參數。免疫檢查時標準點(能夠是倍比稀釋的,也能夠不是)濃度假設和相應的吸光度(OD)值假設能夠出現直線當然是zui抱負的了,這時能夠經過EXELL等利便的取得擬合曲線,進而推算出樣品的濃度值。

    2.對于標準曲線的擬合辦法,直線、二次曲線、三次曲線、指數、對數等雖都可用于ELISA及其它生物學反響中的曲線擬合,但都只合用于曲線的一部分,有的合用于前半段,有的合用于后半段,有的合用于中心一段,而Logistic曲線則對曲線的悉數都有較好的合用性。在一個長的區間內,Logistic應當都能擬合得較為抱負。假設用來定量,S形曲線的中心段(較陡處)是對比好的,而兩真個平整部分計算誤差會大,有時乃至會很大。用于免疫檢查的所謂“標準曲線”真實稱為擬合曲線對比適宜。現在國際上zui盛行的免疫檢查擬合辦法是“四參數邏輯擬合”,用這種擬合辦法通常能夠對比的反映濃度和吸光度的曲線,從而進一步對比的取得樣品中待測物質的濃度值。但咱們做免疫檢查很少有時候能夠有這么抱負的情況,標品濃度和相應OD值通常是"S"型的曲線,這時就不能用直線擬合的辦法了,而對擬合辦法進行挑選即是必要的了。

    3.ELISA試劑盒樞紐在于你的標準曲線做到了S形的哪一部分,你想檢查的樣品濃度在曲線的哪一部分。ELISA試劑盒當然,假設用于定量,仍是在中心一段較好。但建模型是一回事,而用它來定量是另一回事。這些辦法當然沒有一種辦法能夠通用,但也都能夠用。但并不是說它即是的。事實上不僅是ELISA,其它良多生物學反響都是S形曲線,也都能夠用Logistic曲線擬合。

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